外泌體提取純化試劑盒（乳液）

 【溫馨提示】：見我司整理的專注外泌體研究，外泌體提取專家，專注外泌體提取試劑盒產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡介：

外泌體是由細胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認為具有細胞間信使的功能，在特定細胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。由本公司自主開發(fā)的外泌體提取試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于乳液中的外泌體提取，可快速高效地獲得外泌體顆粒，可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細胞學實驗和動物實驗等。

保存條件: 

室溫保存，2年有效。

產(chǎn)品組成：

* Nuclease-free, Sterile

自備材料：

高速離心機，渦旋振蕩器，50 mL離心管，1.5 mL離心管，1×PBS緩沖液（無菌）。

產(chǎn)品使用：

一、 樣品預處理

1.      取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于25℃水浴中進行解凍，將完全融化后的樣品置于冰上，如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上；

2.      樣品初始用量：單次提取時的乳液量建議不低于25 mL；

3.      離心去脂：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以10,000 ×g （~9,500 rpm**）離心20 min，去除樣品中的脂質(zhì)及部分蛋白（注：離心后樣品分為三層，上層為脂質(zhì)層，下層為蛋白沉淀，中間層為乳清。離心后上層狀態(tài)為“致密、穩(wěn)定、不易脫落”，若上層“松軟、易脫落”且下層沉淀較多，可重復此步驟，每次離心取中間層液體）；

**為約10 cm有效離心半徑的大離心機換算（≥15 mL離心管），下同。

4.      乳清轉(zhuǎn)移：將去除脂質(zhì)的乳清（中間層液體）轉(zhuǎn)移至新的50 mL離心管中（注：可用槍頭將上層脂質(zhì)戳破后緩慢傾倒，或用移液器轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移后的乳清中帶有少量脂質(zhì)和沉淀是正常現(xiàn)象，不影響后續(xù)實驗）。

二、 去除雜蛋白

1.      乳清澄清：乳清中加入 Solution A，將離心管顛倒混勻至呈現(xiàn)“半透明狀”，再加入Solution B，顛倒混勻后于2℃至8℃靜置10 min；（注：靜置完成后輕輕晃動離心管，呈現(xiàn)“豆花狀”固體，液體部分為“透明狀”。若未呈現(xiàn)“豆花狀”或樣品仍為“乳白色”，可再適當加入Solution B至液體為“透明狀”）；

注：具體加入量根據(jù)乳清體積按上表等比例換算

2.      離心去蛋白：將澄清后的乳清于 4℃以 10,000 ×g （~9,500 rpm**）離心10 min，收集上清液；

3.      上清液過濾：將收集的上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心過濾柱中，于4℃以5200 rpm（~3000 ×g）離心2 min(注：若未過濾完全，可重復此步驟。50 mL離心過濾柱為一次性耗材，不建議重復使用)；

4.      將過濾后的上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入Solution C 后顛倒混勻（注：Solution C加入劑量和Solution B 劑量保持一致）。

三、 提取外泌體

1.      上清液預處理：在加入Solution C后的上清液中加入Solution D，具體加入劑量如下（其他劑量請根據(jù)表中的用量等比例換算）：

2.      溶液混合：加入Solution D后將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻1 min，再放置于4℃靜置1 h以上（注：增加靜置時間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）；

3.      沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）離心60 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒（注：盡可能吸盡上清液）；

4.      再次離心：將含有沉淀的離心管再次于 4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）離心2 min，棄上清（注：盡可能吸盡上清液）；

5.      外泌體重懸：取合適量的1×PBS均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中（建議每25 mL乳液用200 μL左右1×PBS重懸）；

6.      收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃ 以12,000 ×g（~12,400 rpm*）離心2 min，保留上清液，其中富含外泌體顆粒（注：若沉淀較多，可12,000 ×g，2 min 離心多次至無明顯沉淀，每次取上清液，外泌體溶液可能帶有淡淡的乳白色，此為正常現(xiàn)象）。

*為約7 cm有效離心半徑的小離心機換算（≤2 mL離心管）。

7.      外泌體的保存：純化后的外泌體以合適體積進行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續(xù)實驗使用。

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學研究，不得用于醫(yī)學診斷及其他用途！

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