植物囊泡提取純化試劑盒（多汁植物）

【溫馨提示】：見我司整理的專注外泌體研究，外泌體提取專家，專注外泌體提取試劑盒產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡介：

植物囊泡在細(xì)胞間通訊、免疫調(diào)節(jié)及跨物種調(diào)控中具有重要研究價值，但其提取面臨植物組織成分復(fù)雜（如多糖、酚類干擾物）和細(xì)胞壁致密的技術(shù)瓶頸，導(dǎo)致得率低、純度不足。

本試劑盒專為多汁植物設(shè)計，可高效釋放植物組織中的囊泡，并去除植物組織中的非囊泡成分，獲得的植物囊泡可用于電鏡分析、NTA粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)等。

保存條件: 

Solution A -80℃保存，有效期1年，使用前4℃化凍，分裝使用避免反復(fù)凍融；

其他組分常溫運(yùn)輸保存，有效期1年。

產(chǎn)品組成：

* Nuclease-free, Sterile

自備材料：

一、實(shí)驗(yàn)材料/耗材

1、削皮刀、水果刀、玻璃砧板等（可以把待提取植物處理成方便榨汁的小塊的用具）；

2、400 mL燒杯1~2個；

3、50 mL離心管、1.5mL EP管若干；

4、pH試紙，1~10（廣泛），5.5~8.5（精密）。

二、實(shí)驗(yàn)設(shè)備

電子秤；碾磨榨汁機(jī)（推薦使用，可搜索原汁機(jī)購買）；4℃高速離心機(jī)；水浴鍋；渦旋振蕩器。

三、實(shí)驗(yàn)試劑

1×PBS溶液（無菌）

產(chǎn)品使用：

一、榨汁前準(zhǔn)備

1、榨汁機(jī)消毒：將榨汁機(jī)各部件拆分開，噴灑75%酒精仔細(xì)擦拭后，放入生物安全柜紫外消毒至少20 min；

2、樣品準(zhǔn)備：按照試劑盒處理量準(zhǔn)備待提取樣品；

注：試劑盒處理量

3、樣品處理：將新鮮的待提取植物洗凈外表皮后，用無塵布擦干，放入生物安全柜紫外消毒至少20 min后，將植物切成方便榨汁的小塊；

注：a. 皮厚的植物（如葛根）需要先洗凈外皮、消毒后去皮切小塊或削成薄片；

b. 皮薄的植物（如三七、地黃、姜黃）可以洗凈外皮，消毒后直接切小塊，準(zhǔn)備榨汁。

二、榨汁

1、榨汁機(jī)準(zhǔn)備：在生物安全柜下，將完成消毒的榨汁機(jī)部件按照榨汁機(jī)說明書組裝；

2、榨汁：將切好的植物小塊投入榨汁機(jī)榨汁，質(zhì)地偏硬的植物注意少量多次，收集植物汁

液，榨汁完成。

注：如需控制內(nèi)毒素，榨汁過程請在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

三、離心去雜

1、低速離心去雜：將榨汁后的汁液于 4℃，5,000 ×g，10 min離心，收集上清；

2、高速離心去雜：將低速離心后收集的上清于 4℃，10,000 ×g，10 min離心，收集上清。 四、提取囊泡

1、上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)后的植物汁液中加入混勻的Solution A 試劑，添加劑量如下（其他劑量可按添 加比例換算）：

注：Solution A 試劑使用前需混勻。

2、混合孵育：加入Solution A試劑后蓋好管蓋，顛倒混勻8~10次，將混合液37℃水浴16 h左右（過夜）；

3、調(diào)pH：將孵育好的混合液取出，在生物安全柜下用試劑盒自帶的1M NaOH和1%檸檬酸將混合液pH調(diào)至7.0；

4、高速離心去雜：將調(diào)pH后的上清4℃，10,000 ×g，20 min離心后收集上清；

5、過濾：將收集到的上清依次經(jīng)1 μm濾膜和0.45 μm 濾膜過濾；

注：如需獲得30-1000 nm植物囊泡，可只進(jìn)行1 μm 濾膜過濾，不進(jìn)行0.45 μm濾膜過濾。

6、加提取試劑：取上步離心上清液加入Solution B試劑，添加劑量如下（其他劑量請等比例換算）：

7、二次混合孵育：加入Solution B后擰緊管蓋，通過渦旋振蕩器混勻1 min，將混合液4℃靜置4 h左右；

8、沉淀植物囊泡：取孵育好的混合液，于4℃，10,000 ×g，60 min離心，棄上清，將含有沉淀的離心管再次于4℃，10,000 ×g，2 min離心后，吸盡上清；

注：沉淀中富含植物囊泡，需盡可能吸盡上清液。

9、植物囊泡重懸：取合適量的 1×PBS 均勻吹打離心沉淀，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL EP管中（建議每20 mL植物汁液用400 μL左右1×PBS 重懸）；

10、植物囊泡收獲：將含有重懸液的1.5 mL EP管于4℃，12,000 ×g 離心2 min，保留上清液，其中富含植物囊泡顆粒；

注：若沉淀較多，可12,000 ×g，2 min離心多次至無明顯沉淀，每次取上清。

五、純化和保存植物囊泡

1、純化植物囊泡：將收獲的植物囊泡顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于4℃，3,000 ×g離心10 min，離心后收集EPF柱管底的液體，此液體即為純化后的植物囊泡顆粒；

注：a. EPF柱不可重復(fù)使用； b. 如需獲得大顆粒植物囊泡，可不進(jìn)行該步驟。

2、植物囊泡保存：將純化后的植物囊泡以合適體積進(jìn)行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

結(jié)果展示：

粒徑及BCA結(jié)果展示

注意事項：

1.      試劑盒內(nèi)的Solution A溶液，可以按照單次使用量分裝，保存在-80℃，使用前4℃解凍，解凍后盡快用完，禁止反復(fù)凍融。

2.      Solution A 試劑靜置有棕黃色沉淀，屬于正常現(xiàn)象，使用前需混勻。

3.      若對內(nèi)毒素有嚴(yán)格要求，榨汁步驟請嚴(yán)格在生物安全柜下進(jìn)行，關(guān)鍵用品和儀器注意消毒后使用。

4.      純化后的植物囊泡可保存在-80℃冰箱中，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致植物囊泡破裂。

5.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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