外泌體提取純化試劑盒（組織）

【溫馨提示】：見我司整理的專注外泌體研究，外泌體提取專家，專注外泌體提取試劑盒產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡介：

外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。由本公司自主開發(fā)的外泌體提取純化試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于多種組織的外泌體提取（包括腦、心、肝、肺、肌肉、脾、淋巴結(jié)、胸腺、胚胎、腫瘤等組織），可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒，可用于電鏡分析、 NTA 粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)等。

保存條件: 

Solution A2存儲于-18℃以下；其他組分常溫保存；有效期2年。

產(chǎn)品組成：

* Nuclease-free, Sterile

自備材料：

高速離心機(jī)，渦旋振蕩器，2 mL離心管，1.5 mL離心管，1×PBS緩沖液（無菌）。

產(chǎn)品使用：

一、 樣品預(yù)處理

1.      提前將Solution A2置于4℃或冰上融化并混勻；

2.      組織剪碎：在消毒器皿（置于冰上）中將組織剪切成1 mm³～3 mm³左右的碎組織塊 （剪切得越小越好）；

3.      組織碎片清洗：將組織碎塊轉(zhuǎn)移至離心管中，加入不少于10 倍體積的1×PBS緩沖液，振蕩混勻后300 ×g（~2,000 rpm*）離心10 min，棄上清；

*為約7 cm有效離心半徑的小離心機(jī)換算（≤2 mL離心管），下同。

4.      組織消化：按照每0.1 g組織塊加入1 mL Solution A2 的比例，將組織塊與Solution A2混勻在2 mL離心管中，橫放于37℃、80 rpm恒溫?fù)u床上孵育20 min（或在37℃水浴鍋中孵育30 min，每5 min混勻一次）；

5.      離心取上清：反應(yīng)液以8,000 ×g（~10,100 rpm）離心10 min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；

6.      離心去雜質(zhì)碎片：將離心上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm）離心10 min，去除樣品中的雜質(zhì)碎片；

7.      上清液轉(zhuǎn)移：去除雜質(zhì)碎片的上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。

二、 提取外泌體

1.      加Solution B2 試劑：上一步獲得的上清液中加入1/4 體積的Solution B2 試劑；

2.      溶液混合：將離心管蓋緊，通過渦旋振蕩器混勻1 min， 再放置于4℃靜置1 h以上（注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）；

3.      沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm）離心30 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒（盡可能吸盡上清液）；

4.      再次離心：將含有沉淀的離心管再次于 4℃以 12,000 ×g（~12,400 rpm）離心2 min，棄上清（注：盡可能吸盡上清液）；

5.      外泌體重懸：取合適量的1×PBS均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中（建議每0.1 g組織用200 μL左右1×PBS重懸）；

6.      收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃ 以12,000 ×g（~12,400 rpm）離心2 min，保留上清液，其中富含外泌體顆粒（注：若沉淀較多，可12,000 ×g，2 min離心多次至無明顯沉淀，每次取上清液）。

三、 純化外泌體

1.      純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm）離心10 min，離心后收集EPF柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒（注：EPF柱不可重復(fù)使用）；

2.      外泌體的保存：純化后的外泌體以合適體積進(jìn)行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

注意事項(xiàng)：

1.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

常見問題及解決方法：

一、 產(chǎn)品試劑保存問題：

1.      Solution A2 使用前后應(yīng)保存于-18℃條件下，建議分裝后使用，應(yīng)避免反復(fù)凍融；

2.      Solution B2 始終保存在室溫條件下即可，溫度過低可能使該溶液中出現(xiàn)白色結(jié)晶，且難以復(fù)溶（需要高溫），少量沉淀不影響提取效果。

二、 純化柱使用問題：

1.      一般情況下，每個(gè)樣品按照說明書操作，“3,000 ×g （~6,200 rpm）離心10 min”即可一次性純化完畢。 如果上柱中仍有液體殘留，將純化柱轉(zhuǎn)換方向放置于離心機(jī)中（區(qū)別于上一次放置方向即可），再次重復(fù)離心；

2.      若通過上述操作，上柱中仍有較多液體殘留，請將上柱中的液體轉(zhuǎn)移至新的純化柱中，繼續(xù)重復(fù)離心操作，直至上柱液體全部轉(zhuǎn)移至下柱中。

三、 外泌體得率問題：

一般情況下，0.1 g組織樣品（以心肌組織為例）可以提取出100~200 μg外泌體（5E+9~1E+10 Particles 總量），因不同組織外泌體含量不同，得率會有一定差異。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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