外泌體提取純化試劑盒(細(xì)胞上清)
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝規(guī)格 |
NW3209-2T | 外泌體提取純化試劑盒(細(xì)胞上清) | 2T |
NW3209-20T | 外泌體提取純化試劑盒(細(xì)胞上清) | 20T |
【溫馨提示】:見我司整理的專注外泌體研究,外泌體提取專家,專注外泌體提取試劑盒產(chǎn)品專題。
產(chǎn)品簡介:
外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能,在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號(hào)分子;然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。由本公司自主開發(fā)的外泌體提取純化試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,可用于電鏡分析、NTA 粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。
保存條件:
室溫保存,2年有效。
產(chǎn)品組成:
名稱 | NW3209-2T | NW3209-20T |
Exosome Concentration Solution* | 12 mL | 120 mL |
Exosome Purification Filter* | 2 Tubes | 20 Tubes |
* Nuclease-free, Sterile
自備材料:
高速離心機(jī),渦旋振蕩器,50 mL離心管,1.5 mL離心管,1×PBS緩沖液(無菌)。
產(chǎn)品使用:
一、 樣品預(yù)處理
1. 取樣:如果是凍存樣品,從冰箱取出后于25℃水浴中進(jìn)行解凍,將完全融化后的樣品置于冰上,如果是新鮮樣品,收集樣品后置于冰上;
2. 樣品初始用量:單次提取時(shí)的樣品量建議細(xì)胞培養(yǎng)上清液不低于20 mL;
3. 離心去細(xì)胞碎片:將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中,于4℃以3,000×g(~5,200 rpm**)離心10min,去除樣品中的細(xì)胞碎片(注:若沉淀較多,可3,000 ×g,10 min 離心多次至無明顯沉淀,每次取離心上清液);
**為約10 cm有效離心半徑的大離心機(jī)換算(≥15 mL離心管),下同。
4. 離心去雜質(zhì)碎片:將離心上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,于4℃以10,000 ×g(~9,500 rpm**)離心10 min,去除樣品中的雜質(zhì)碎片;
5. 上清液轉(zhuǎn)移:去除雜質(zhì)碎片的上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。
二、 提取外泌體
1. 上清液預(yù)處理:在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入 Exosome Concentration Solution(ECS 試劑),具體的加入劑量如下(其他劑量請(qǐng)根據(jù)表中的用量等比例換算):
樣品名稱 | 樣品劑量 | ECS劑量 |
細(xì)胞上清 | 20mL | 5mL |
2. 溶液混合:加入ECS 試劑后將離心管蓋緊,通過渦旋 振蕩器混勻1 min,再放置于4℃靜置8h以上(注:增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率,但不可超過24 h);
3. 沉淀外泌體:取出裝有混合液的離心管于4℃以10,000 ×g(~9,500 rpm**)離心60 min,棄上清,沉淀中富含外泌體顆粒(注:盡可能吸盡上清液);
4. 再次離心:將含有沉淀的離心管再次于 4℃以 10,000 ×g(~9,500 rpm**)離心2 min,棄上清(注:盡可能吸盡上清液);
5. 外泌體重懸:取合適量的1×PBS均勻吹打離心沉淀物,待其溶解后,將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中(建議每20 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清用200 μL左右1×PBS重懸);
6. 收獲外泌體顆粒:將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃ 以12,000 ×g(~12,400 rpm*)離心2 min,保留上清液,其中富含外泌體顆粒(注:若沉淀較多,可12,000 ×g,2 min離心多次至無明顯沉淀,每次取上清液)。
*為約7 cm有效離心半徑的小離心機(jī)換算(≤2 mL離心管),下同。
三、 純化外泌體
1. 純化外泌體:將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter(EPF 柱)上室中,于 4℃以 3,000 ×g(~6,200 rpm*)離心 10 min,離心后收集 EPF柱管底的液體,此液體即為純化后的外泌體顆粒(注:EPF 柱不可重復(fù)使用);
2. 外泌體的保存:純化后的外泌體以合適體積進(jìn)行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
注意事項(xiàng):
1. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途!
相關(guān)產(chǎn)品:
產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 包裝規(guī)格 |
120ml | ||
20T | ||
20T | ||
20T | ||
30T | ||
20T | ||
20T | ||
20T | ||
30T | ||
20T | ||
5T | ||
20T | ||
20T | ||
20T | ||
20T |