Sgel 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

SgeI可切割在單鏈或雙鏈 DNA 上含有5-甲基胞嘧啶的 DNA 靶標(biāo)。SgeI 限制性內(nèi)切酶可識(shí)別 ??CNNG(9/13)^ 位點(diǎn)，并于37°C下在其獨(dú)特的緩沖液中的切割效果最佳。為確保一致的性能，該酶Storage Buffer中包含預(yù)混合 BSA，其可增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性，并與 DNA 制劑中可能存在的污染物相結(jié)合。 

識(shí)別位點(diǎn)：

??CNNG(9/13)
5'...?? C N N G(N)? ↓...3'
3'... G N N C(N)?? ↑...5'*
*SgeI 可識(shí)別與切割含有5-mC位點(diǎn)的DNA靶標(biāo)序列，一條鏈或雙鏈甲基化均可被識(shí)別。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× Sgel緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對(duì)于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

在1× SgeI Buffer條件下，1 μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50 μl反應(yīng)體系中37℃孵育1 h，不斷增加酶量，直至酶切產(chǎn)物 DNA帶 型不隨著酶量的增加而發(fā)生變化，此時(shí)酶量定義為 1 U。

核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：

將3U Sgel與超螺旋質(zhì)粒DNA 在37℃溫育4 h，通過(guò)DNA電泳檢測(cè)質(zhì)粒無(wú)變化。

功能活性檢測(cè)：

37℃下，5 U AarI能夠在1 h 內(nèi)完全消化1 μg p615 DNA。

核酸外切酶殘留檢測(cè)：

將5 U Sgel與雙鏈DNA 底物在37℃溫育1 h，通過(guò)DNA電泳檢測(cè)雙鏈DNA底物無(wú)變化。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

注：反應(yīng)體系可以按比例放大或縮小。反應(yīng)時(shí)間不建議超過(guò)1 h。

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時(shí)離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)（可選）。

甲基化修飾影響

注意事項(xiàng)：

1.      底物至少需要2個(gè)SgeI識(shí)別序列才能有效酶切。

2.      甲基化DNA完全酶切取決于SgeI的識(shí)別位點(diǎn)的數(shù)量，另外由于識(shí)別位點(diǎn)酶切產(chǎn)生的DNA產(chǎn)物會(huì)促進(jìn)SgeI的非特異性酶切，因此建議酶切時(shí)優(yōu)化SgeI酶量用于酶切反應(yīng)。

3.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)常規(guī)限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品：