AarI

產(chǎn)品簡介：

AarI屬于Type IIS型限制酶，是PaqCI的完全同裂酶，識別CACCTGC序列并在其下游進行切割，形成4堿基的5'突出。不同于常規(guī)的Type IIS限制酶，AarI酶切需要兩個或兩個以上識別位點，搭配隨酶附贈的激活劑可實現(xiàn)完全酶切，在沒有激活劑的情況下可以酶切，但無法酶切完全。AarI的識別序列長達7堿基，在基因中的出現(xiàn)頻率較低，尤其適合用于Golden Gate組裝。

識別位點：

CACCTGC(4/8)
5'...C A C C T G C (N)?↓...3'
3'...G T G G A C G (N)?↑...5'

同裂酶：PaqCI

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× FastCut 緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h 內(nèi)完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測：

37℃下，5 U AarI能夠在1 h 內(nèi)完全消化1 μg p615 DNA。

超長時間溫育檢測：

37℃下，將5 U AarI與1 μg p615 DNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

37℃下，使用5 U AarI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將超過95%酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開約95%以上的連接產(chǎn)物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響AarI酶活性；

b. AarI完全酶切需要按1:1的比例加入和酶體積一致的激活劑，激活劑在電泳時表現(xiàn)為幾十bp左右的條帶，請避免誤判為非特異性切割。

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1~3 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。

注意事項：

1.      AarI是PaqCI的完全同裂酶；

2.      AarI完全酶切需要兩個或兩個以上識別位點；

3.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

4.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強;

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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