外泌體紅色熒光標記染料(PKH26)
Exosome Red fluorescent labeling dye (PKH26)
產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 |
NW3216 | 外泌體紅色熒光標記染料(PKH26) | 20μL(1mM) |
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產品簡介:
PKH26 外泌體紅色熒光標記染料能將帶有較長脂質尾巴的黃色-橙色熒光染料(PKH26)結合到細胞膜脂質區域上。該試劑可以在染色過程中增加染色效率,同時維持細胞活力??捎糜谕饷隗w的標記染色實驗,監測細胞吞噬作用。
產品組成:
組分 | 名稱 | 規格 |
A | PKH26 linker(for red fluorescent cell labeling) | 20 μL |
B | Diluent C(for General Membrane Labeling) | 200 μL |
熒光波長:λex 551 nm;λem 567 nm
保存條件:
2-8℃避光(一年有效)
產品使用:
一、外泌體蛋白定量:
取適量外泌體進行 BCA 蛋白濃度測定以確定外泌體蛋白量;
二、 染料工作液制備:
用“Diluent C”將“PKH26 linker(for red fluorescent cell labeling)” 儲存液稀釋 10 倍,配制濃度為 100 μM 的染料工作液(避光操作,工作液應根據實驗用量適當配制,現配現用);
三、外泌體染色:
1. 在外泌體中加入染料工作液,建議加入劑量如下:
外泌體蛋白量 | 加入染料工作液劑量 |
10 - 200 μg | 50 μL |
200 - 500 μg | 100 μL |
500 - 1000 μg | 200 μL |
2. 加入染料工作液后將離心管蓋緊,通過渦旋振蕩器混勻1 min,再靜置孵育10min;
3. 向孵育后的外泌體-染料復合物中加入10 mL的1×PBS混勻;
4. 按照外泌體提取方法再次提取外泌體以去除多余染料;
5. 取200μL 1×PBS重懸沉淀物,沉淀即為染色后的外泌體。
注意:過度染色會導致外泌體膜完整性喪失,最佳PKH26染料/外泌體用量需根據自身實驗而決定。
注意事項:
1. PKH26 母液易水解,建議分裝保存,分裝后用封口膜密封保存;
2. PKH26 工作液應現配現用,不能提前配制,否則將影響染色效果;
3. PKH26 溶解液在較低溫度下會凝固而粘在管底內,可以 37℃水浴片刻至全部融解后使用。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題:
1. 建議用于染料標記的外泌體原始濃度達到 0.5~1 μg/μL。外泌體濃度過低實驗失敗風險較高。
2. 外泌體染色步驟中去除游離染料的步驟必不可少,以避免游離染料對后期實驗的干擾。這一步相當于重新提取外泌體,所有外泌體提取純化方式都適用。
3. 染料標記外泌體與細胞共孵育的培養條件盡可能使用無血清培養基,以提高細胞對染料標記外泌體的攝取效率,共孵育參考時長為2~24 h。
4. 本染料也可用于細胞膜染色,參考劑量染料濃度為2 μM,細胞濃度為1×107 cells/mL。
5. 由于外泌體染色效率難以達到100%,且在去除游離染料過程中無法避免外泌體的損失,因此,建議制備2倍于共孵育實驗所需外泌體量以進行染料標記實驗。
本產品僅用于生命科學研究,不得用于醫學診斷及其他用途!
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