殺稻瘟菌素S(滅瘟素)(10mg/ml)
Blasticidin S (10mg/ml)
產品簡介:
殺稻瘟菌素S(Blasticidin S)是一種分離自灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的核苷肽類抗生素,通過特異性干擾核糖體肽鍵形成,強效抑制原核與真核細胞的蛋白質合成。本品主要用于篩選攜帶bsr或BSD耐藥基因的轉染細胞,具有起效迅速、作用強勁的特點,通常一周內即可完成陽性克隆篩選,且極低濃度即可快速殺滅敏感細胞。
本品為溶于HEPES緩沖液(pH7.5)的即用型無菌溶液,濃度10mg/ml。細菌篩選常用濃度為25–100μg/ml,哺乳動物細胞篩選常用濃度為1–50μg/ml。初次實驗建議通過殺滅曲線確定最佳工作濃度,以實現篩選效率與成本的最優化。
保存條件:
-20℃保存(一年有效)
產品特性:
1) 同義名:Blasticidin S Hydrochloride; 滅瘟素S鹽酸鹽; 稻瘟散;
2) CAS NO.:3513-03-9
3) 分子式:C17H26N8O5·HCl
4) 分子量:458.9
5) 純度:>95%(HPLC)
6) 化學結構式:
產品使用:
1. 大腸桿菌(E. coli)篩選(推薦濃度:25–100 μg/ml)
大腸桿菌對Blasticidin S天然敏感性較低,但攜帶bsr或BSD抗性基因的轉化子可在低鹽LB固體培養基(pH 8.0)中,采用100μg/ml Blasticidin S進行高效篩選。注意:適當提高pH值(至8.0)可顯著增強抗生素的篩選活性,提高陽性克隆檢出率。
2. 哺乳動物細胞篩選(常用濃度:1–50μg/ml)
哺乳動物細胞系Blasticidin S的推薦工作濃度范圍為1–50μg/ml。由于不同細胞系對抗生素敏感性差異較大,初次實驗強烈建議通過殺滅曲線(kill curve)確定最佳篩選濃度,以實現高效篩選并最大限度降低對細胞毒性。
一些哺乳動物細胞的建議工作濃度:
細胞系 | 培養基 | Blasticidin S篩選濃度 |
CHO | DMEM | 5-10μg/ml |
HEK293 | DMEM | 5-15μg/ml |
HeLa | DMEM | 2.5-10μg/ml |
Neuro2a | DMEM | 30μg/ml |
B16 | RMPI | 3-10μg/ml |
PC1.0 | RMPI | 10-30μg/ml |
THP-1 | RMPI | 10μg/ml |
篩選步驟:
1)轉染48h后,用含適宜濃度Blasticidin S的新鮮培養基進行傳代培養。
【注】:抗生素在細胞活躍分裂期發揮最佳效應,細胞密度過高會降低篩選效率,傳代時細胞匯合度建議控制在25%以內。
2)隨后每3–4天棄去舊培養基,加入含相同濃度Blasticidin S的新鮮培養基,持續維持選擇壓力。
3)7天后觀察并評估細胞克隆形成情況。根據細胞類型及轉染/篩選效率,克隆形成時間可適當延長至14天或更久。
4)挑取5–10個抗性細胞克隆轉移至35 mm細胞培養皿中,繼續用選擇培養基維持培養7天,隨后可進行細胞活性或功能檢測。
注意事項:
1. Blasticidin S為有毒化合物,操作時需注意防護,切勿與身體或皮膚直接接觸。
2. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅用于生命科學研究,不得用于醫學診斷及其他用途!
常用篩選抗生素及其使用濃度:
貨號 | 名稱 | 抗性基因 | 有效篩選濃度(μg/mL) |
大腸桿菌潮霉素抗性基因 (hyg,hph) | 哺乳動物細胞:200-500 細菌/植物細胞:100-300 真菌:300-1000 | ||
蠟樣芽孢桿菌的bsr基因 土曲霉的BSD基因 | 哺乳動物細胞:1-10 大腸桿菌:25-100 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 酵母菌:10 絲狀真菌:25-150 | ||
Sh ble基因(Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene) | 哺乳動物細胞:50-1000 大腸桿菌:25-50 酵母菌:50-300 | ||
Tn601 (903)或Tn5來源的新霉素抗性基因(neo) | 哺乳動物細胞:200-2000 植物細胞:10-100 酵母細胞:500-1000 網柄菌屬:10-100 | ||
鏈霉菌來源的嘌呤霉素N-乙酰轉移酶基因(pac) | 哺乳動物細胞:1-10 大腸桿菌:100-125 |