瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒（離心柱法）

產品介紹 

本試劑盒適用于從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時除去蛋白質、其他有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質。采用特殊的 吸附膜和獨特的緩沖液系統，選擇性的吸附核酸分子，可回收100bp-30kb大小的片段，回收率可達80%以上。使用本試劑盒回收的DNA可適用 于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化、文庫篩選和體外翻譯等實驗。

注意事項 

1 使用前檢查各組分是否出現沉淀。若有，請輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。 

2 實驗前使用平衡液處理吸附柱，可以充分激活硅膠膜，提高得率。平衡液處理過的柱子，最好當天使用，放置時間過長會影響效果。

3 電泳時應使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。 

4 如下一步實驗要求較高，則應盡量使用TAE電泳緩沖液。 

5 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對DNA造成損傷。 2.6 如果回收率低，可在膠充分溶解后檢測pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 3M醋酸鈉（pH5.2）將pH值調到 5-7之間。

使用流程

柱平衡步驟

向吸附柱 AP30中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液，12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回 收集管中。（請使用當天處理過的柱子）。

提取步驟

1 將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量。 

2 向膠塊中加入3倍體積的溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100μl，則加入300μl溶膠液），50℃水浴放置，其間不斷溫和上下 翻轉離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可繼續放置幾分鐘或再補加一些溶膠液。

注意：為了提高結合效率，膠塊完全溶解 后將溶液溫度降至室溫再上柱。 

3 將上一步所得溶液用移液器轉移到吸附柱AP30中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2min。12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒 掉收集管中的廢液，將吸附柱AP30放入收集管中。 

4 向吸附柱AP30中加入500μl洗滌液 II （請先檢查是否加入無水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將 吸附柱AP30放入收集管中。 

5 重復操作步驟4。

6 將吸附柱AP30放入收集管中，12,000rpm（~13，400×g）離心2min，目的是將吸附柱中殘余的洗滌液 II去除。將吸附柱AP30置于室溫放 置數分鐘，徹底晾干，以防止洗滌液 II中殘留的乙醇影響下一步實驗。

7 將吸附柱AP30置于一個干凈的離心管中，向吸附柱膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫液，室溫放置2min，12,000rpm（~13,400×g）離心 1min，將DNA溶液收集到離心管中，如不立即進行下游實驗，于-20℃保存備用。