支原體qPCR檢測試劑盒
MycoEZ, Mycoplasma qPCR Kit MycoEZ
產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 | 目錄價 |
M5010-0025 | MycoEZ 支原體qPCR檢測試劑盒 | 25rxn | 2000 |
【產品介紹】
MycoEZTM支原體檢測試劑盒可對細胞培養物進行快速、高靈敏的支原體污染檢測,可以檢測出的支原體種類如下:
Mycoplasma Group | Strains | |||
Mycoplasma spp. | M. arginini | 精氨酸支原體 | M. hyorhinis | 豬鼻支原體 |
M. arthritidis | 關節炎分支原體 | M. orale | 口腔支原體 | |
M. bovis | 牛支原體 | M. pirum | 梨支原體 | |
M. capricolum | 山羊支原體 | M. pneumoniae | 肺炎支原體 | |
M. fermentans | 發酵支原體 | M. pulmonis | 肺支原體 | |
M. hominis | 人型支原體 | M. salivarium | 唾液支原體 | |
M. hyopneumoniae | 豬肺炎支原體 | M. yeatsii | 酵母支原體 | |
支原體檢測試劑盒包含以下組分:
Component | M5010-0025 (25 preps) |
MycoEZ? Lysis Buffer A (Blue) | 200 μL |
MycoEZ? 2X Probe Fast qPCR Master Mix (Brown) | 125 μL |
MycoEZ? Positive Control 1000 copies/μL (Orange) | 18 μL |
MycoEZ? Negative Control (Yellow) | 18 μL |
MycoEZ? 20X TaqMan Assay Dye (Green) FAM labeled (Ext.~490 nm / Emi.~520 nm) | 12.5 μL |
Nuclease-Free Water (Translucent) | 1 mL |
【使用方法】
(A)樣本準備
1. 取 50 μL細胞培養液等樣本至0.5 mL離心管內,放入離心機,以2000 ×g離心3 min。
2. 用移液器小心地棄掉上清(約50 μL)( 可能沉淀不可見)。
3. 取8 μL MycoEZTM Lysis Buffer A 到 0.5 mL 離心管內,吹打均勻。
4. 用移液槍上下吹打,使沉淀溶解,準備qPCR反應。
(B)qPCR 反應液準備
qPCR 反應體系為 10μL,各試劑如下表,加入PCR管中:
Component | Volume for one 10 μL reaction | ||
Test (μL) | Positive Control (μL) | Negative Control (μL) | |
Nuclease-Free Water | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
MycoEZ? 20X TaqMan Assay Dye | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
MycoEZ? 2X Probe Fast qPCR Master Mix | 5 | 5 | 5 |
Digested lysate | 2 | 0 | 0 |
MycoEZ? Positive Control | 0 | 2 | 0 |
MycoEZ? Negative Control | 0 | 0 | 2 |
Total volume (μL) | 10 | 10 | 10 |
(C)qPCR 實驗
Step | Time | Temp. | Data Collection | Note |
Hold | 1 min | 95°C | ★ Polymerase Activation | |
Cycle (35) | 3 sec | 95°C | ■ | Denature / Anneal / Extend |
30 sec | 60°C |
★ 聚合酶激活需要超過1分鐘 ■FAM標記 (Ext.~490 nm / Emi.~520 nm)
(D) 分析數據
1. 手動設置閾值為0.2。
2. 陰性對照無熒光信號,陽性對照(2000 copies)=Ct 28±1。
3. 確定每個樣本Ct值(計算樣本支原體拷貝數)。
4. 支原體拷貝數計算器網站鏈接:http://www.xpbiomed.com/newsinfo/7178381.html
【儲存條件及保質期】
該試劑盒的所有組分需在-20℃環境中保存,有效期36個月。干冰運輸。
僅用于科研使用,不能用于臨床診斷和治療。