X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

產品簡介：

X-Gal，英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside，中文全名5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，CAS NO：7240-90-6，是β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）的組織化學顯色底物，能被水解生成半乳糖和5-溴-4-氯-3-羥基吲哚。5-溴-4-氯-3-羥基吲哚是一種可溶、無色的吲哚水解產物，隨后通過二聚合和氧化反應，被轉化為一不可溶藍色產物-5,5’-二溴-4,4’-二氯靛藍。

X-Gal是分子生物克隆實驗中用來檢測β-gal活性的一種主流試劑，可用來檢測外源DNA是否插入質粒DNA的lacZ區。當外源DNA成功插入lacZ區，會破壞β-gal的α-互補，導致其活性喪失，則無法水解X-Gal使得菌落呈白色。而保留β-gal正常活性的細菌能產生藍色菌落。許多其它應用也常將X-Gal用作底物來檢測β-gal活性，這些應用包括：1）β-gal-抗體連接的免疫分析和免疫組化；2）基于β-gal誘導的大腸桿菌噬菌體檢測；3）腫瘤進展微轉移形成的檢測。

X-Gal常常與IPTG（貨號：NBS2005-1g）聯合使用進行藍白斑克隆篩選。本品達分子生物學級別。

基本特性：

1）CAS NO：7240-90-6

2）英文同義名：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside; X-b-D-Galactoside; BCIG;X-Gal;

3）分子式：C14H15BrClNO6 

4）分子量：408.63 g/mol

5）純度：≥99%

6）外觀：白色至類白色或無色粉末

7）溶解性：溶于DMF（20mg/ml），DMSO

8）化學結構圖：

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，2年有效。

產品使用：

1. X-Gal儲存液配制

稱取0.2g X-Gal裝入15ml離心管，加入10ml DMF，震蕩使其充分溶解。按照1ml/管分裝，并用鋁箔紙包裹離心管使其避光，置于-20℃凍存，正常情況下6-12個月穩定。

2. IPTG儲存液配制

稱取0.238g IPTG（貨號：NBS2005-1g）溶于10ml去離子水中，充分溶解混勻后，經0.22μm濾膜過濾除菌，即得到100mM（100×）的儲存液。按照1ml/管分裝，置于-20℃凍存，高達一年穩定。

3. 藍白斑篩選方法

X-Gal常與IPTG聯合使用進行藍白斑克隆篩選。

方法1：X-Gal、IPTG加入固體培養基（推薦）

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養基，并冷卻到50℃左右；

2）每ml培養基內加入10μl 20mg/ml X-gal溶液、10μl 100mM IPTG（使其終濃度達到1mM）；

3）加入適量篩選抗生素如氨芐青霉素，卡那霉素，羧芐青霉素等；

4）混勻后倒板，置于無菌超凈臺內使培養基凝固（通常需要30min）。

【注意】：藍白斑篩選用的平板請置于4℃避光保存，1周穩定。

5）將轉化的感受態細胞涂布到上述平臺，于37℃倒置培養過夜，觀察藍白斑情況。

方法2：X-Gal、IPTG直接涂布平板表面

1）于無菌超凈臺內干燥倒好的平板；

2）加120μl 20mg/ml X-gal溶液、40μl 100mM IPTG到平板表面，并涂布均勻覆蓋整個平板；

3）于無菌超凈臺內干燥上述平板，至少需要30min；

4）將轉化的感受態細胞涂布到上述平臺，于37℃倒置培養過夜，觀察藍白斑情況。

注意事項：

1.      X-gal的首選溶劑為DMF。若使用DMSO作為溶劑，選擇相對新鮮且高質量的DMSO極為重要，持續性的研究發現由于使用舊或低質量DMSO造成很多問題。建議大部分實驗都用DMF作為溶劑。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。