新型鈣離子熒光探針Calbryte520, AM

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（NBS2009-1g）一起使用，以提高探針的水溶性。

產品簡介：

鈣離子檢測在生命科學研究中具有關鍵作用?；跓晒馓结樑c鈣離子結合的光譜響應特性，研究人員可通過熒光顯微鏡、流式細胞儀、熒光光譜和熒光酶標儀等技術精確監測細胞內游離鈣離子濃度的動態變化。自1989年Fluo-3問世以來，后續開發的Fluo-4、Fluo-8和Cal-520系列探針雖提升了信背比，但Fluo-4仍存在顯著缺陷：與Fluo-3類似，幾乎所有基于Fluo-4的胞內鈣檢測都必須使用丙磺舒（probenecid）來防止探針外泄，而該抑制劑已被證實會產生復雜的細胞效應，嚴重影響檢測結果。

Calbryte? 520通過革命性突破解決了這一技術難題——其顯著提升的信噪比和優化的胞內滯留特性（無需丙磺舒），使其成為目前最可靠的鈣檢測工具。該探針與Fluo-4具有完全一致的激發/發射波長，可直接兼容現有Fluo-4檢測系統的所有參數設置，為研究人員提供了更精準、更便捷的實驗方案。

產品優勢：

1.低背景熒光：與Ca2?結合后顯著增強熒光信號，能有效降低背景干擾，提高檢測靈敏度。

2.多色兼容性：綠色熒光，適用于多通道成像

3.細胞膜通透性： 疏水性AM酯可被動穿透細胞膜，被胞內酯酶水解后形成帶負電荷的熒光染料，實現簡單負載

產品特性：

1）分子量：1090.90

2）溶劑：DMSO

3）解離常數（Kd，nM）：1200

4）Ex/Em：493/515

保存條件: 

-20℃避光保存

產品使用：

一、儲備溶液的配制

除非另有說明，所有未使用的儲備液應在配制后分裝為單次使用量，并保存于-20°C。避免反復凍融。

Calbryte520, AM 儲備溶液

使用高質量無水DMSO配制2-5 mM的Calbryte520, AM儲備液。請注意，體積僅用于制備儲備溶液。有關適當的實驗/生理緩沖液，請參閱樣品實驗方案。

注意：Calbryte520, AM溶于DMSO后為無色透明溶液。

二、工作溶液配制 

Calbryte520, AM 工作溶液

實驗當天，將Calbryte520, AM溶解于DMSO或將儲備液 aliquot 解凍至室溫。

在所選緩沖液（如Hanks和Hepes緩沖液）中加入0.04% Pluronic F-127，配制2-20 μM的Calbryte520, AM工作液。對于多數細胞系，推薦終濃度為4-5 μM。具體染料加載濃度需根據實驗條件優化。

注意1： 非離子型表面活性劑Pluronic F-127可增強Calbryte520, AM的水溶性。

注意2： 若細胞存在有機陰離子轉運體，可在工作液中加入1-2 mM丙磺舒（貨號：NBS2007）（孔板終濃度0.5-1 mM）以減少水解后染料的泄漏。我司提供多種丙磺舒：包括水溶性的丙磺舒（NBS2008-154MG），能降低有機溶劑的使用。

三、實驗操作流程

以下為活細胞加載AM酯的推薦方案，請根據實際需求調整。

1. 將細胞于生長培養基中孵育過夜。

2. 次日向細胞板中加入1X Calbryte520, AM工作液。

注意：若待測化合物與血清存在干擾，加載前需更換為新鮮HHBS緩沖液。

3. 將加載染料的細胞板置于37°C培養箱孵育1-2小時。

4. 移除工作液，更換為HHBS或含陰離子轉運抑制劑（如1 mM丙磺舒）的緩沖液以清除多余探針。

5. 加入刺激劑后，立即使用配備FITC濾光片的熒光顯微鏡或者具備程序化液體處理系統的熒光酶標儀（如FDSS、FLIPR或FlexStation）Ex/Em = 490/525 nm，截止波長515 nm檢測熒光信號

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。。

2.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。