細(xì)胞膜熒光探針（Tracers for Membrane Labeling）產(chǎn)品專題

（DiI，DiO，DiD，DiR，DiA，Celltracker CM-DiI）

傳統(tǒng)細(xì)胞膜探針：

A，DiI, DiO, DiD和DiR：

DiI, DiO, DiD和DiR作為一類長(zhǎng)鏈的親脂性二烷基碳菁類染料(Dialkylcarbocyanines)熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜以及其他脂溶性生物結(jié)構(gòu)，尤其是DiI，廣泛用于活體和固定組織及細(xì)胞的神經(jīng)元逆行性和順行性示蹤。

作為一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子（例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱）結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。一旦進(jìn)入細(xì)胞后，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，最佳濃度條件下可將整個(gè)細(xì)胞染色。這些染料具很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。

四種染料呈現(xiàn)不同的熒光顏色，DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI分別用標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC濾光器檢測(cè)，可結(jié)合使用。DiD可被633 nm氦-氖（He-Ne）激光激發(fā)，具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，特別適合用于標(biāo)記具本底熒光的細(xì)胞和組織。而，DiR在體內(nèi)活體成像或者示蹤中意義非凡，因其所發(fā)射的紅外光可以高效地穿過細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。

Fig. DiO（NBS5128）、DiI（NBS5129）、DiD（NBS5131）、DiR（NBS5132）結(jié)合到磷脂雙分子層上的標(biāo)準(zhǔn)化熒光發(fā)射光譜圖。

B， DiA：

DiA為親脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），常用于神經(jīng)元的示蹤，可與DiI聯(lián)合使用進(jìn)行神經(jīng)細(xì)胞的雙色標(biāo)記。研究發(fā)現(xiàn)，某些情況下當(dāng)DiO不能標(biāo)記固定組織時(shí)，DiA可得到良好標(biāo)記效果。DiA與磷脂雙層膜結(jié)合后，光譜遷移明顯加強(qiáng)。正由其發(fā)射光譜非常廣，在適當(dāng)?shù)臑V光片下，可以綠色、橙色，甚至紅色熒光被檢測(cè)到。 

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C，CM-DiI（活細(xì)胞的多代示蹤、固定細(xì)胞長(zhǎng)期示蹤）,改良的細(xì)胞膜探針：

Cell-Tracker CM-DiI為DiI的衍生物，在DiI中加入了具有中度巰基反應(yīng)特性的氯甲基取代物，后者能與細(xì)胞內(nèi)含巰基的肽和蛋白結(jié)合，使得CM-DiI能夠抵抗醛類的固定作用。CM-DiI在細(xì)胞固定、破膜及石蠟包埋的整個(gè)過程中均能很好的保留在細(xì)胞內(nèi)，因此，與傳統(tǒng)細(xì)胞膜探針DiI相比較，更適于固定后標(biāo)本的長(zhǎng)期示蹤。其紅色/綠色的光譜特征，使其可與綠色探針或者綠色熒光蛋白如GFP一起用于雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)。

Cell-Tracker CM-DiI具以下特征：a）使用方便，只需吸掉培養(yǎng)液，加入探針，30min孵育，顯微成像；b）熒光信號(hào)至少可持續(xù)72h以上（一般3-6代），染料只傳到子代細(xì)胞，不會(huì)染上鄰近細(xì)胞。c）毒性很低，不會(huì)影響細(xì)胞增殖和活力。總而言之，Cell-Tracker CM-DiI具有良好的示蹤特征，對(duì)細(xì)胞無毒，穩(wěn)定長(zhǎng)效，染料很好保留在細(xì)胞內(nèi)，生理pH熒光信號(hào)強(qiáng)。

研究證實(shí)，CM-DiI標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注入體內(nèi)，可以有效的顯示移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。 

細(xì)胞膜探針光譜和檢測(cè)濾片：1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA濾光器的選擇參見下表：

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D. DiIC18(3)-DS/DiIC18(5)-DS（磺酸化的碳菁類染料）

由于弱水溶性，通常很難加載長(zhǎng)鏈碳菁類染料比如DiI、DiO和PKH到懸浮細(xì)胞內(nèi)。為了應(yīng)對(duì)此處難題，我司開發(fā)出磺酸化的碳菁類染料（Sulfonated Carbocyanines）-DiIC18(3)-DS和DiIC18(5)-DS，在維持DiI和DiD的18碳親脂鏈的基礎(chǔ)上，改善其在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)的水溶性。只需簡(jiǎn)單的將這些染料的DMSO儲(chǔ)存液稀釋到原培養(yǎng)基內(nèi)（工作濃度范圍1~10uM）即可完成探針的加載。活細(xì)胞對(duì)陰離子碳菁類染料的吸收速率明顯慢于陽離子碳菁類染料，得到的染色結(jié)果可能差異較大。

某些應(yīng)用要求經(jīng)過以醛類為媒介的固定和脂質(zhì)提取后膜染料還能保留在原位。與DiO、DiD或PKH染料標(biāo)記相比，某些磺酸化的碳菁類染料似乎與標(biāo)準(zhǔn)醛類為基礎(chǔ)的固定方法和丙酮處理兼容，至少在某些細(xì)胞系內(nèi)。

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注意事項(xiàng)：

1.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。